LAB: Día 6

Las células llevan transfectadas 48 horas, por lo que ya han podido expresar nuestra proteína de interés, pudiendo así ver su fluorescencia en microscopía de confocal, para lo que hay que preparar las células. Retiramos el medio de cultivo y lavamos las células con PBS, luego añadimos PFA para fijar las células y conservar su estructura celular. Dejamos el PFA actuar y luego lavamos las células múltiples veces con PBS. Los cubres con las células fueron montados en un portaobjetos. Añadimos DAPI, un colorante azul que únicamente tiñe el núcleo de las células, para que sea así más fácil localizarlas en el microscopio. Dejamos secar unos minutos y fijamos el cubreobjetos con laca de uñas al portaobjetos. Luego observamos nuestras células bajo el microscopio.

Herbario-ULL

Hoy hemos visitado el herbario de la Universidad de La Laguna. Para comenzar, recibimos una charla a cerca de lo que es un herbario y el tipo de plantas que podemos encontrar en estos y como se clasifican. Hicimos un taller en el cual preparamos unas plantas para ser desecadas y prensadas, dejándolas listas para formar parte de un herbario. Además, recibimos unas plantas ya desecadas para poder preparar con ellas nuestro propio herbario. Más tarde, paseamos por la institución, dónde pudimos observar la sala en la cual guardan todos los herbarios, además del más antiguo que se conserva en esta universidad y el contenido de algunos.

Pensamiento computacional-2ª.clase

Hoy en la clase de pensamiento computacional hemos usado el programa «Scratch» para crear nuestro propio juego usando varios comandos. Después hemos tenido la oportunidad de jugar a él usando «Mackey mackey», que es un set de cables y una placa que permiten interactuar con objetos cotidianos para jugar a distintos juegos. Con esto, también jugamos en grupos a distintos juegos creados por otros usuarios en «Scratch».

LAB: Día 5

Hoy hemos seleccionado las mejores construcciones para transfectarlas con las células. Las transfectamos con PEI y después le pusimos optiMEM. Las agitamos y añadimos un micro gramo de ADN. Después gorreamos las mezclas y las dejamos reposar 20 minutos. Añadimos la mezcla a los pocillos con las células mediante pipeteo por goteo. Después empleamos las otras 2 horas en planificar nuestra presentación. 

LAB: Día 4

Las colonias que sembramos en el medio se han multiplicado, multiplicando así nuestros plásmidos. Utilizamos un kit para extraer y purificar el plásmido de las bacterias. Medimos el rendimiento de la extracción utilizando el nanodrop. Después hicimos una mezcla que dividimos en 7 tubos, y a cada uno le añadimos el ADN de una colonia de bacterias. Además, dejamos un tubo con solo mezcla como valor negativo.

Introducimos las PCR en el termociclador, y mientras preparamos un gel de agarosa con GelRed. Pusimos 5ul del producto de PCR en el gel para hacer una electroforesis. El plásmido que hemos hecho, ha de ser introducido en las células que hicimos el día anterior para así poder ver la proteína BK baja microscópica de florescencia. Como el flask en el que actualmente tenemos las células no se puede usar para microscópica e florescencia, así que vamos a pasar las células a cubreobjetos (con Poly-L-lysine para que las células se peguen) que colocaremos en placas de 12 pocillos. 

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Vocabulario

  • Agarosa: compuesto polisacárido que se utiliza para separar moléculas en función de su tamaño, carga y función.
  • Tripsina: sustancia líquida utilizada para despegar las células de la placa. La utilización de esta sustancia conlleva inconvenientes puesto que si se prolonga el tiempo de exposición destruye las células.
  • PBS: solución acuosa y salina que contiene cloruro sódico, fosfato sódico, cloruro potásico y fosfato de potasio. Es uno de los buffers más utilizados porque no es tóxico para las células. 
  • DMEM:  medio de cultivo celular sintético que permite el crecimiento in vitro proporcionando los nutrientes esenciales requeridos por la célula. Es una mezcla de sales enriquecida con  aminoácidos y otros componentes esenciales para el crecimiento celular.
  • TAE:   disolución que actúa de tampón. Se usa frecuentemente en electroforesis.
  • Electroforesis: técnica de separación de  de moléculas debido al movimiento de estas en un campo eléctrico. Este proceso se debe realizar sobre una superficie húmeda.
  • GelRed: es un tinte de ácido nucleico que proporciona un color rojo a la mezcla.
  • Transformación de bacterias: uno de los tres procesos por los que se puede introducir adn exógeno a una célula bacteriana. Los otros son la conjugación y la transducción. 
  • Ampicilina: antibiótico extensamente utilizado para el tratamiento de infecciones bacterianas. 

Divulgación científica – 2ª. clase

En esta clase de divulgación científica hemos estado trabajando en nuestro blog y en la presentación del proyecto que tendremos que exponer el próximo viernes. Hemos dividido el trabajo en dos grupos, la mitad hemos ultimado las entradas del diario del blog y la otra mitad ha comenzado la presentación. Además creamos una cuenta de Twitter para que nuestro trabajo sea más accesible para todos. Así que podéis seguir a @AsclepioDr. Y también en Instagram, ¡esta es nuestra cuenta!: @Dr_Asclepio.

LAB: Día 3

En el día de hoy, introducimos la proteína BK que hemos construido introduciendo la proteína fosforescente en líneas celulares; que para este caso, utilizamos la H3K293T, que son células epiteliales embrionarias de riñón. Para ello, lo primero que hicimos fue aspirar el medio de cultivo de DMEM High Glucose y añadimos 5ml de PBS1x estéril para limpiar mediante una propipeta unida a una pipeta serológica y lo metimos en la incubadora de líneas durante 5min a 37ºC.

Pasados los 5min, aspiramos nuevamente el PBS y añadimos 1ml de tripsina, empleada para despegar las células del flask. Como la tripsina es dañina para las células si se prolonga demasiado el tiempo de exposición, le añadimos 5ml de DMEM para contrarrestar y se recoge todo en un tubo de 15ml, llamado coloquialmente falcom. Centrifugamos durante 4 min a 1500 rpm y eliminamos el sobrenadante. Resuspendimos en 5ml de DMEM y le dimos un vortex (para elevar los posos del fondo). Extraemos 10 micro litros de Typan Blue y 10 micro litros de la mezcla previa. La añadimos a un tubo, de donde extraímos 10 micro litros de la mezcla resultante y procedímos a contar las células con la cámara de Neubaswe y con el contador automático EVE y, por último, sembramos 0,7×10^6 células, y calculamos cuantos micro litros necesitábamos para nuestras células. 

Inglés científico – 2ª. clase

Esta clase la empezamos proponiendo preguntas que nos resultaran curiosas sobre el medioambiente y problemas relacionados a nivel global, enteramente en inglés. Hicimos una encuesta común con estas preguntas con las que salimos del aula para preguntarles gente de la facultad, obteniendo resultados diversos. Una vez hechas las encuestas, recopilamos los datos obtenidos e hicimos un estudio sobre estos.

Microscopía electrónica

En esta visita, fuimos a ver los dos microscopios electrónicos de la universidad. Nos explicaron que el primero se trataba de un microscopio de barrido; esto quiere decir que muestra solo la parte exterior de las cosas que queremos captar. El segundo, que se trata de uno de los 6 que hay actualmente en España, era capaz de ver el interior de los objetos a analizar debido a que trabajaba con electrones (al contrario de los normales que trabajan con luz). Además, pudimos ver imágenes sacadas con esos microscopios, en las que se podían apreciar cosas tan diminutas como ojos de hormigas, los múltiples niveles de ventosas de los rejos de un bebé pulpo e incluso átomos de plata.

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