LAB: Día 3

En el día de hoy, introducimos la proteína BK que hemos construido introduciendo la proteína fosforescente en líneas celulares; que para este caso, utilizamos la H3K293T, que son células epiteliales embrionarias de riñón. Para ello, lo primero que hicimos fue aspirar el medio de cultivo de DMEM High Glucose y añadimos 5ml de PBS1x estéril para limpiar mediante una propipeta unida a una pipeta serológica y lo metimos en la incubadora de líneas durante 5min a 37ºC.

Pasados los 5min, aspiramos nuevamente el PBS y añadimos 1ml de tripsina, empleada para despegar las células del flask. Como la tripsina es dañina para las células si se prolonga demasiado el tiempo de exposición, le añadimos 5ml de DMEM para contrarrestar y se recoge todo en un tubo de 15ml, llamado coloquialmente falcom. Centrifugamos durante 4 min a 1500 rpm y eliminamos el sobrenadante. Resuspendimos en 5ml de DMEM y le dimos un vortex (para elevar los posos del fondo). Extraemos 10 micro litros de Typan Blue y 10 micro litros de la mezcla previa. La añadimos a un tubo, de donde extraímos 10 micro litros de la mezcla resultante y procedímos a contar las células con la cámara de Neubaswe y con el contador automático EVE y, por último, sembramos 0,7×10^6 células, y calculamos cuantos micro litros necesitábamos para nuestras células. 

Dejar un comentario

Introduce tus datos o haz clic en un icono para iniciar sesión:

Logo de WordPress.com

Estás comentando usando tu cuenta de WordPress.com. Salir /  Cambiar )

Imagen de Twitter

Estás comentando usando tu cuenta de Twitter. Salir /  Cambiar )

Foto de Facebook

Estás comentando usando tu cuenta de Facebook. Salir /  Cambiar )

Conectando a %s

Crea tu sitio web con WordPress.com
Comenzar
A %d blogueros les gusta esto: